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    西澳菲斯特農(nóng)場(chǎng)赤桉樹(shù)蜂蜜對(duì)血虛證模型小鼠的影響

    作者:趙立波,陳家鈴,陶春霖來(lái)源:《中國(guó)食品》日期:2024-10-22人氣:1017

    再生障礙性貧血(Aplastic amemia,,AA),又稱血虛證,為中醫(yī)臨床常見(jiàn)候,是一種以造血功能衰竭為特征的疾病,其發(fā)病機(jī)制主要骨髓造血干細(xì)胞損傷、造血微環(huán)境損傷以及免疫性造血抑制等機(jī)制相關(guān)。目前,治療AA的主要藥物如環(huán)孢素(cyclosporine A,CsA)存在使用后反應(yīng)率較低且復(fù)發(fā)率較高的缺點(diǎn)。

    蜂蜜入藥在我國(guó)有悠久的歷史。蜂蜜用途廣泛貨源充足價(jià)格適中對(duì)人體無(wú)毒副作用,在中藥及中成藥制劑生產(chǎn)中具有獨(dú)特的地位。菲斯特農(nóng)場(chǎng)赤桉樹(shù)蜂蜜(Fewster's Farm jarrah honey,F(xiàn)FJH)中含多種礦物質(zhì),且種類含量與人體血液中的數(shù)值十分相近,易被人體吸收利用。同時(shí)其還含有多種人體細(xì)胞、組織和器官所需的營(yíng)養(yǎng)成分。本研究以西澳菲斯特農(nóng)場(chǎng)赤桉樹(shù)蜂蜜為研究對(duì)象,通過(guò)建立小鼠血虛模型,探究服用不同劑量TA10+FFJH以及TA30+FFJH對(duì)小鼠血虛癥狀的影響。

    一、實(shí)驗(yàn)材料

    1.實(shí)驗(yàn)藥品與試劑西澳菲斯特農(nóng)場(chǎng)赤桉樹(shù)蜂蜜(Fewster's Farm jarrah honey,F(xiàn)FJH),洋妝源(上海)網(wǎng)絡(luò)科技有限公司;乙酰苯肼、淋巴細(xì)胞分離液(美國(guó)SIGMA公司);環(huán)磷酰胺,(上海華聯(lián)制藥有限公司);促紅細(xì)胞生成素(EPO)ELASA試劑盒(美國(guó)R&D Systems公司);其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純或生化試劑。

    2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇BALB/c小鼠80只,購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。雌雄各半,年齡為8~12周,體重控制在18g~22g。飼養(yǎng)溫度為23℃±1℃,濕度控制在40%~60%,24h光暗循環(huán),通風(fēng)良好,飼養(yǎng)期間保證小鼠自由飲水飲食。

    二、試驗(yàn)方法

    1.模型建立模型的建立以及檢測(cè)參考文獻(xiàn)的方法,按乙酰苯肼、X 射線、環(huán)磷酰胺聯(lián)合應(yīng)用的方法建立再生障礙性貧血小鼠模型,試驗(yàn)周期為45 d45d后頸椎脫臼處死小鼠,采樣進(jìn)行檢測(cè)。

    實(shí)驗(yàn)分組:選取BALB/c小鼠80只,在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,將其分為以下8組:①正常對(duì)照組;②血虛模型組;③25%-TA10+FFJH組;④50%-TA10+FFJH組;⑤75%-TA10+FFJH組;⑥25%-TA10+FFJH組;⑦50%-TA10+FFJH組;⑧75%-TA10+FFJH組;每組小鼠10只。

    實(shí)驗(yàn)流程:聯(lián)合乙酰苯肼、X 射線、環(huán)磷酰胺建立再生障礙性貧血小鼠模型。將不同劑量蜂蜜溶解至等量生理鹽水中,從第7d開(kāi)始,以每天一次的頻率按各組劑量對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃,同時(shí)對(duì)空白對(duì)照組以及血虛模型組小鼠灌胃等體積生理鹽水,實(shí)驗(yàn)周期45d45d后頸椎脫臼處死小鼠,采樣進(jìn)行檢測(cè)。

    2.各組小鼠一般行為學(xué)觀察經(jīng)上述步驟處理45d后,對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)靈活度反應(yīng)敏捷度毛發(fā)光澤度脫毛情況及體重變化情況進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)。

    3.外周血檢測(cè)

    1細(xì)胞計(jì)數(shù)各實(shí)驗(yàn)組第45d,對(duì)各組小鼠進(jìn)行稱重,經(jīng)眼眶取血,測(cè)定外周血血紅蛋白含量、紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板數(shù);在顯微鏡下觀察外周血涂片并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

    2EPO濃度測(cè)定EPO是一種重要的造血調(diào)控因子,血液中EPO水平能反映機(jī)體生成紅細(xì)胞的能力。參考文獻(xiàn)的方法,對(duì)血液進(jìn)行樣品處理,使用試劑盒對(duì)血液中EPO含量進(jìn)行測(cè)定,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出樣本EPO濃度(pg/mL)。

    4.骨髓有核細(xì)胞(BMCs)計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)參考陳姍姍等的方法,頸椎脫臼處死小鼠, 取右側(cè)股骨,用PBS緩沖液反復(fù)沖洗,取骨髓細(xì)胞懸液,配平至相同體積,取0.2mL細(xì)胞懸液裂解紅細(xì)胞后,自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)BMCs數(shù)量。

    5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)至少重復(fù)3次,結(jié)果以Means±SEM表示。采用Origin8.5和SPSS分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析,統(tǒng)計(jì)結(jié)果P0.05認(rèn)為有顯著性差異。

    三、結(jié)果與分析

    1.血虛模型小鼠一般行為學(xué)觀察與正常對(duì)照組相比,血虛模型組小鼠陸續(xù)出現(xiàn)皮毛蓬亂光澤度降低,以及部分脫毛現(xiàn)象,且隨實(shí)驗(yàn)進(jìn)程的發(fā)展,癥狀逐漸加重。同時(shí)小鼠出現(xiàn)精神不佳、活動(dòng)減少、體重下降的癥狀。

    對(duì)比服用各FFJH劑量組與血虛模型組發(fā)現(xiàn),服用FFJH組小鼠皮毛光澤度下降脫毛程度均有減輕,同時(shí)精神狀態(tài)有明顯提升。各組小鼠的體重平均值如圖1所示,通過(guò)對(duì)比可以看出,灌胃FFJH各組小鼠的平均體重均高于血虛模型組,且呈劑量對(duì)應(yīng)關(guān)系,說(shuō)明FFJH對(duì)血虛引起的小鼠體重下降有抑制作用。同時(shí),通過(guò)在同劑量添加下體重值對(duì)比可以觀察到TA30+FFJH較TA10+FFJH效果更佳。


    注:與空白組比,#代表與空白對(duì)照組相比差異顯著,P0.05表示與模型組相比差異顯著。

    2.FFJH對(duì)血虛模型小鼠外周血三系水平影響1為不同F(xiàn)FJH劑量組、空白對(duì)照組以及血虛模型組外周血中血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)以及血小板(PLT)水平情況。由表1可以看出,血虛模型條件下,小鼠血常規(guī)中的各項(xiàng)指標(biāo)均顯著降低(P0.01),即血虛模型組小鼠血象三系水平明顯下降。服用各FFJH劑量組與血虛模型組比,小鼠外周血三系水平均有所提升,且呈劑量對(duì)應(yīng)關(guān)系,實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明, FFJH對(duì)小鼠再生障礙性貧血有顯著改善效果(P0.01)。

    1 FFHJ對(duì)小鼠外周血的影響

    組別

    數(shù)量(只)

    Hb(g/L)

    RBC(×1012/L)

    WBC(×109/L)

    PLT(×109/L)

    空白對(duì)照組

    10

    158.65±13.43

    10.02±1.32

    9.94±2.11*

    860.21±30.12*

    血虛模型組

    10

    76.18±14.53##

    4.12±1.43##

    2.23±0.98##

    359.23±15.21##

    25%TA10+

    FFJH組

    10

    120.12±12.23**

    6.23±2.12

    2.43±0.12

    560.12±52.58**

    50%TA10+

    FFJH組

    10

    128.33±5.12**

    7.24±1.32*

    3.54±0.87

    771.60±31.69**

    75%TA10+

    FFJH組

    10

    156.20±15.22**

    9.52±1.43**

    7.13±2.11**

    831.38±73.15**

    25%TA30+

    FFJH組

    10

    136.20±5.24**

    6.52±1.44

    3.13±1.13

    631.38±23.15**

    50%TA30+

    FFJH組

    10

    141.32±25.02**

    8.77±1.81**

    4.21±1.24

    782.02±13.16**

    75%TA30+

    FFJH組

    10

    162.27±5.24**

    9.01±1.44**

    8.13±1.13**

    891.38±18.15**

    注:與空白組比較,##代表與空白對(duì)照組相比差異極顯著,P0.01 *表示與模型組相比差異顯著,P0.05,**表示與模型組相比差異極顯著,P0.01。

    3.FFJH對(duì)血虛模型小鼠EPO濃度測(cè)定

    研究表明,EPO具有抗凋亡以及促進(jìn)血管生成的作用,其濃度水平能直觀反映骨髓紅系造血功能障礙程度,如圖2為不同F(xiàn)FJH劑量組、空白對(duì)照組以及血虛模型組EPO濃度測(cè)定結(jié)果。血虛模型條件下,小鼠血清中的EPO濃度顯著提高(P0.01)。而各FFJH劑量組與血虛模型組EPO含量均顯著降低,并呈劑量對(duì)應(yīng)關(guān)系(P0.01)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明FFJH對(duì)再生障礙性貧血小鼠外周血各種血細(xì)胞形成有促進(jìn)作用且通過(guò)組間數(shù)據(jù)對(duì)比發(fā)現(xiàn),同劑量添加條件下TA30+FFJH組較TA10+FFJH組EPO濃度下降更明顯,這說(shuō)明TA30+FFJH較TA10+FFJH降低EPO濃度作用更好。

    注:與空白組比較,##代表與空白對(duì)照組相比差異極顯著,P0.01**表示與模型組相比差異極顯著,P0.01。

    4.FFJH對(duì)小鼠BMCs水平的影響如圖3為不同F(xiàn)FJH劑量組、空白對(duì)照組以及血虛模型組BMCs水平。與空白組相比,模型組小鼠的造血干細(xì)胞數(shù)量顯著下降(P0.01)。同時(shí)各FFJH劑量組BMCs水平明顯高于血虛模型組,并呈劑量對(duì)應(yīng)關(guān)系(P0.05),推測(cè) FFJH有促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖的效果,可以抑制再生障礙性貧血小鼠有核細(xì)胞減少,進(jìn)而對(duì)骨髓的造血機(jī)能產(chǎn)生明顯的促進(jìn)作用通過(guò)組間數(shù)據(jù)對(duì)比可以發(fā)現(xiàn),同劑量添加條件下TA30+FFJH組較TA10+FFJH組促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖的效果更明顯,這說(shuō)明TA30+FFJH較TA10+FFJH促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖作用更好。

    注:與空白組比,##代表與空白對(duì)照組相比差異極顯著,P0.01**表示與模型組相比差異極顯著,P0.01。

    四、結(jié)論

    綜上所述,本實(shí)驗(yàn)建立小鼠血虛模型,觀察各組小鼠體重變化、外周血常規(guī)、EPO濃度以及骨髓單個(gè)核細(xì)胞數(shù)的差異,發(fā)現(xiàn)FFJH可以改善血虛模型小鼠再生障礙性貧血導(dǎo)致的精神不佳、毛發(fā)光澤受損、體重下降的癥狀。服用FFJH后模型小鼠血象三系水平以及骨髓細(xì)胞水平下降速度明顯減緩(P0.01),且EPO水平波動(dòng)明顯減小,并呈劑量對(duì)應(yīng)關(guān)系(P0.01),說(shuō)明FFJH能有效緩解修復(fù)血虛模型處理小鼠骨髓造血微環(huán)境受損。本研究也存在一定不足之處,實(shí)驗(yàn)雖然證明了FFJH可以機(jī)體補(bǔ)充相關(guān)營(yíng)養(yǎng)素以減輕小鼠血虛癥狀,但未對(duì)調(diào)節(jié)血虛癥癥狀的具體機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步研究。


    文章來(lái)源:  《中國(guó)食品》   http://www.007hgw.com/w/qt/29400.html

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