玉屏風散配方顆粒湯劑與傳統飲片湯劑中總多糖含量的比較

摘要：目的：觀察比較玉屏風散配方顆粒湯劑與傳統飲片湯劑中總多糖含量。方法：采用紫外-分光光度法測定比較同批號等劑量的玉屏風散配方顆粒湯劑和傳統飲片湯劑中總多糖的含量，其波長為490nm。結果：以葡萄糖濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，得標準曲線回歸方程：y=0.0707x-0.0004，r=0.9997，葡萄糖濃度在9.22-55.45μg/ml范圍內線性關系良好；平均回收率為98.24%，RSD為1.53%，玉屏風散配方顆粒湯劑總多糖含量為134.79mg，玉屏風散傳統飲片湯劑總多糖含量為137.76mg。結論：同批號等劑量的玉屏風散配方顆粒湯劑與傳統飲片湯劑總多糖含量相當。

關鍵詞：玉屏風散；配方顆粒湯劑；傳統飲片湯劑；總多糖含量 

Abstract:Object：To study comparison on content of total polysaccharides in dispensing granules decoction and traditional herbs decoction of yupingfengsan.Method：Comparison on content of total polysaccharides in dispensing granules decoction and traditional herbs decoction of yupingfengsan of same lot number and isodose by using UV spectrophotometry.the wavelength is 490nm. Result: The abscissa was the content of glucose and the ordinate was absorbance value. to obtain the regression equation: y=0.0707x-0.0004，r=0.9997. the content of glucose showed a good linear relationship at a range of 9.22-55.45μg/ml,the average recovery was 98.24% and RSD was 1.53%.the content of glucose in dispensing granules decoction of yupingfengsan is 134.79mg. the content of glucose in traditional herbs decoction of yupingfengsan is 137.76mg. Conclusion: Content of total polysaccharides in dispensing granules decoction and traditional herbs decoction of yupingfengsan of same lot number and isodose were equivalent.

Keywords:yupingfengsan; dispensing granules decoction ; traditional herbs decoction; content of total polysaccharides

湯劑作為傳統中藥劑型，雖具有吸收快、療效好、能隨證加減等優點，但亦有服用攜帶不便、質量標準不明等缺點。中藥配方顆粒是以符合炮制規范的優質藥材為原料，采用現代高新技術提取、濃縮、制粒而成的產品系列，具有可直接沖服、使用及攜帶方便等優點，在臨床使用逐漸增多。玉屏風散，由黃芪、防風、白術(炒)三味藥組成。功能益氣、固表、止汗，用于表虛不固，自汗惡風，廣泛用于治療以體虛易感病人，用于預防、治療病毒引起的感冒等呼吸系統疾病以及免疫功能紊亂為主的多種病證，也可作為增強機體免疫力的保健藥應用[1-3]。為給中藥配方顆粒替代中藥飲片提供依據，本研究采用紫外-分光光度法將玉屏風散配方顆粒湯劑與傳統飲片湯劑中總多糖的含量進行了對比研究以說明兩種劑型總方中整體化學信息的一致性。

1材料

1.1儀器  

TU-1000型紫外可見分光光度計(北京市通用儀器設備公司)；TG16-WS臺式高速離心機(湖南賽特湘儀離心機儀器有限公司)；MM-2型快速旋渦振蕩器(江蘇省姜堰市沈高康健生化器具廠)；KQ-100型超聲清洗器(昆明市超聲儀器有限公司)；BP211D型電子天平（德國Sartarius公司）；GSY-8型電熱恒溫水浴鍋（北京醫療設備廠意成公司）。

1.2試藥與試劑

玉屏風散飲片、配方顆粒（由同批次相應飲片制備而成），均由廣州一方制藥有限公司提供，由山西中醫學院中藥鑒定教研室張朔生教授鑒定；葡萄糖對照品購自中國藥品生物制品檢定所；試驗用水為自制去離子水；無水乙醇、苯酚和濃硫酸均為分析純。

2方法與結果

2.1處方、配方顆粒及湯劑制備

2.11處方組成：黃芪30g，白術30g，防風15g。

2.12黃芪配方顆粒制備：取黃芪飲片2kg第1次加水煎煮60min，第2次加水煎煮30min，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度約為1.30(50℃)的清膏，真空干燥，得干浸膏，粉碎，以95%乙醇制粒，干燥，即得約800 g顆粒。

2.13防風配方顆粒制備：取防風飲片1kg，第1次加水，第2次加水，均煎煮30min，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度約為1.30(50℃)的清膏，真空干燥，得干浸膏，粉碎，以95%乙醇制粒，干燥，即得約400g顆粒。

2.14白術配方顆粒制備：取白術飲片2kg，第1次加水煎煮60min，第2次加水煎煮30min，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度約為1.30(50℃)的清膏，真空干燥，得干浸膏，粉碎，以95%乙醇制粒，干燥，即得約800g顆粒。

2.15傳統飲片湯劑制備：按處方比例稱取以上三味藥材，加水300ml，煎煮45min，濾過，藥渣加水240ml，煎煮30min，濾過，合并2次濾液，調整體積至250ml備用。

2.16配方顆粒湯劑制備：稱取與藥材相當量的三味配方顆粒，混合，加入80～100℃左右的水200ml，攪拌溶解，冷后加水至250ml備用。

2.2新蒸苯酚溶液配制：取苯酚試劑加熱融解，置圓底燒瓶中采用重蒸鎦法收集185℃的餾分，重復三次得到較純的苯酚溶液，趁熱精密吸取25ml溶液于500ml棕色容量瓶中，加水稀釋至刻度，振搖混勻，置冰箱避光保存[4]。

2.3供試品溶液的制備：精密量取玉屏風散傳統飲片湯劑和配方顆粒湯劑1ml于10ml試管中，滴加無水乙醇4ml，邊滴邊置于快速漩渦振蕩器上振蕩，密封，冷藏放置24h，取出，在2500rpm離心15min，棄去上清液，沉淀加入80％乙醇2ml，充分混合，在2500rpm離心15min，棄去上清液，沉淀加入無水乙醇2ml，充分混合，離心，棄去上清液，反復處理三次，沉淀用熱蒸餾水溶解，放冷。然后置于50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，振搖混勻，作為全方濃多糖溶液。濾過，精密吸取1～2ml全方濃多糖溶液，置10ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，即得。

2.4標準溶液制備：精密稱取葡萄糖對照品0.1003g置于100ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得葡萄糖標準溶液。

2.4多糖含量測定

①波長的選擇：精確量取葡萄糖標準溶液0.6ml置于2ml容量瓶，加水稀釋至2ml，另取供試品溶液2ml置于25ml容量瓶，以下步驟按2.3項下操作，通過紫外-可見分光光度計于200～600nm波長范圍內掃描，標準溶液的最大吸收波長為488nm，供試品溶液最大吸收波長為491nm。故確定490nm為檢測波長。

②標準曲線制作：分別取1.5ml，3ml，4.5ml，6.0ml，7.5ml，9.0ml標準溶液至10ml容量瓶，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，各取0.6ml置于25ml容量瓶中，加入新鮮配制的5%苯酚溶液1.2ml混合均勻后，迅速加入6ml濃硫酸，加水稀釋至刻度，充分混合，室溫放置30min，于TU-1000型紫外可見分光光度計上490nm處測定吸光度，隨行空白對照。以葡萄糖濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，得標準曲線回歸方程：y=0.0707x-0.0004，r=0.9997，葡萄糖濃度在9.22-55.45μg/ml范圍內線性關系良好。

③精密度試驗：精密量取6份葡萄糖標準溶液，每份3ml，按②項下操作，測定吸光度值，得RSD為0.93% (n=6)，顯示該比色法精密度良好。

④穩定性試驗：將同一標準溶液按②項下操作，分別于顯色后0min，30min，60min，90min，120min，150min測定吸光度值，得RSD為0.93% (n=6)，顯示該比色法在150min內穩定性良好。

⑤加樣回收率試驗：將已知含量的樣品多糖（玉屏風散飲片）配成樣品溶液6份，分別加入高低兩種濃度葡萄糖溶液混合成供試液，按②項下操作，測定吸光度并計算回收率。結果見表1。

表1   加樣回收率試驗結果（n=6）

2.5樣品測定    

分別精密吸取玉屏風散傳統飲片湯劑和配方顆粒湯劑溶液2ml，從“加入5%的苯酚溶液1.0ml至在490nm波長處測定吸光度”按2.3和②項下操作，并按照相應的稀釋倍數計算多糖含量。結果見表2。

表2   玉屏風散傳統飲片與配方顆粒湯劑多糖含量測定結果

3  小結

本實驗用硫酸-苯酚法測定多糖含量，方法簡便，快速，供測定用葡萄糖對照品溶液及全方湯劑供試品溶液在400～600nm波長范圍內掃描度，均在490nm處有吸收峰，故選擇490nm為測定波長。實驗比較了同一批玉屏風散傳統飲片湯劑與配方顆粒湯劑中總多糖的含量，結果表明，兩種湯劑中總多糖含量相當，說明兩種劑型總方中整體化學信息具有一致性，為玉屏風散配方顆粒替代傳統飲片使用提供了科學依據。

參考文獻：

[1]林琦，陸陽.黃芪屬植物皂苷類成分研究進展[J].國外醫藥：植物藥分冊,2002,24:143-146.

[2] 徐曉清，米雷敏，黃卓偉.玉屏風散藥理研究及臨床應用進展[J].中醫藥信息，1999,2:16-18.

[3] 姚實林.玉屏風散的藥理研究進展.安徽中醫學院學報，1999,18(5):86-88.

[4]細敏，唐小異，劉勝姿等.白術多糖葡萄糖的含量測定[J].湖南師范大學學報(醫學版)，2004，1(1).